一、项目背景介绍
端粒酶（Telomerase）是由RNA和蛋白质组成的一种核糖核蛋白酶。人端粒酶RNA组分(hTR)于1995年被克隆，其中含有端粒重复序列的模板（5’-CUAACCCUAAC-3’）；蛋白质组分具有RNA依赖的DNA多聚酶活性。端粒酶能以自身RNA为模板复制合成端粒序列，端粒DNA是一系列重复的富含G的DNA序列，这一序列在生物进化中具有高度的保守型（-TTAGGG-),端粒在保护基因组DNA不被降解、防止染色体有害变异（染色体末端融合、重排、移位和缺失等）起重要作用）。端粒酶的功能包括添加端粒重复序列，端粒长度的稳定和维持，以及染色体的整体空间取向、结构完整性和稳定性。
在胚性细胞等增殖活跃的细胞中具有端粒酶活性，而在正常成熟体细胞中端粒酶失活，同时还发现绝大多数永生性细胞株和肿瘤细胞株都呈端粒酶阳性，而在癌旁组织和正常组织中阳性率则很低，推测端粒酶可能是一个广泛的肿瘤标志物，端粒酶反应超越了细胞的增殖限制，这可能是恶性肿瘤发生的一个先决条件。
传统的端粒酶研究方法是以探针延伸为基础测定端粒酶活性，需要大量的样品材料，且检验灵敏度受限，直到1994 年kim等采用端粒重复扩增法（Telomeric Repeat Amplification Protocol,TRAP）所取代。标准的TRAP法检测是通过PCR扩增端粒酶反应的产物，使用放射性标记，经凝胶电泳后，通过放射自显影显示检测结果。该方法相较于传统的方法，检测灵敏度有所提升，然而在检测环节仍然操作繁琐，且结果判读存在主观性。我公司采用的CELL STR ID®端粒酶TRAP+CE检测方法，提升了检测效率（全流程：4-6h），结果判读更加自动化和标准化，且检测灵敏度也有大幅度地提升。
二、端粒酶检测方法及流程介绍
检测端粒酶活性的常用方法：
2.1、直接检测端粒酶（蛋白及RNA的结合复合物）的活性，检测它是否可以延伸RNA模板，然后跑胶或者探针杂交，检测端粒cDNA延伸的长度，以此来判断端粒酶的活性高低。（TRAP法）
不足：经典方法，但该方法需要放射性同位素标记及制胶；重复性差、周期长、主观判读等。
2.2、间接检测端粒酶组分（催化亚基的mRNA量）的表达量。
不足：本质是检测端粒酶的一个组分蛋白TERT的mRNA的表达量, 但是在多数细胞中，端粒酶催化亚基的表达很难检测到,且mRNA的表达量并不一定能准确反映端粒酶的活性强度，因端粒酶是一种由RNA及多种蛋白组成的复合物，TERT酶只是其中较为主要的一种蛋白。
三、HKGENE端粒酶检测（TRAP+CE）流程：
3.1 样本处理：端粒酶提取试剂盒，按照操作说明书，取适量细胞提取蛋白。-80°保存待用。
3.2 端粒扩增：端粒酶扩增试剂盒，按照操作说明，扩增端粒重复序列。
3.3 端粒序列检测：毛细管电泳检测，按照操作说明进行检测。
3.4 端粒扩增产物结果分析： 按照SOP进行数据分析。
3.5 报告整理：
四、CELL STR ID®端粒酶检测委托检测流程
4.1 电话或咨询确认相关信息（价格、样本要求、周期、付款及合同）
4.2 送样检测，填写电子订单发送至微信：caijie037
4.3 检测分析、报告整理、结果发送。
五、相关文献：
5.1Telomeres and telomerase: three decades of progress JW Shay, WE Wright - Nature Reviews Genetics, 2019 - nature.com
5.2 Alternative lengthening of telomeres: Models, mechanisms and implications. Nat Rev Genet. 11:319–330. 2010. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI
5.3 Telomerase activity concentrates in the mitotically active segments of human hair follicles. J Invest Dermatol. 108:113–117. 1997. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI
5.4 Detection of telomerase activity in human cells and tumors by a telomeric repeat amplification protocol (TRAP) Methods in Cell Science 17: 1-15, 1995
六、样本要求及运输
细胞数量：≥1*10的6次方。1.5ml离心管
干冰运输。
七、端粒酶检测意义及延伸服务：
端粒酶检测意义：细胞成瘤性体外评估、细胞传代稳定性评估、iPSC残留检测、端粒酶抑制剂效果评估
延伸服务：端粒酶检测方法学验证、提供配套自检方案（仪器、试剂、软件、技术培训），便于用户实现自主可控监测。同一套仪器可实现STR鉴定、种属鉴定、菌种鉴定、端粒酶检测、HLA分型、宿主细胞DNA片段残留及片段大小分析等。
