1、Luminex液相芯片的介绍
液相芯片,又称悬浮阵列、流式荧光技术,是基于美国Luminex公司研制的多功能流式点阵仪(Luminex 100TM)开发的多功能生物芯片平台,通常用于免疫分析、核酸研究、酶学分析、受体和配体识别分析等研究。也是目前唯一得到权威机构和医学界共同认可用于临床诊断的生物芯片平台。液态芯片是一种全新概念的生物芯片。该技术的核心是把微小的聚苯乙烯小球(5.6um)用荧光染色的方法进行编码,然后将每种颜色的微球(或称为荧光编码微球)共价交联上针对特定检测物的探针、抗原或抗体。 应用时,先把针对不同检测物的编码微球混合,再加入微量待检样本,在悬液中靶分子与微球表面交联的分子进行特异性地结合,在一个反应孔内可以同时完成多达100种不同的生物学反应。最后用LuminexTM分析软件进行分析,仪器通过两束激光分别识别编码微球和检测微球上报告分子的荧光强度。因为分子杂交或免疫反应是在悬浮溶液中进行,检测速度极快,而且可以在一个微量液态反应体系中同时检测多达100个指标。
Luminex 技术应用微球和流式细胞仪的原理。 微球内部含有三种荧光免疫荧光,通过荧光不同的比例可以区分500种不同的微球。每种微球可以用来检测一种不同的蛋白或基因。 因此,利用微球技术,可以同时检测高达500个蛋白或基因。该技术利用荧光编码的微球共价交联单克隆抗体,与被测定的目标分子结合后,加入荧光素标记的检测抗体,再通过激光扫描荧光编码来识别单个微球和测量“检测荧光”强度来确定被测分子的浓度。在使用相同抗体对的条件下,luminex技术的测量结果在准确度、精确度、灵敏度方面与ELISA均可达到相似的水平。Luminex应用的荧光编码微球带有针对不同目标分子的特异性抗体,不同的微球在一定程度上可以自由组合,这样在一次实验中可以同时完成多个目标分子的分析。多目标分子的同时测定可以大大减少生物样品的消耗量,节省成本和测定时间,并且使多种目标分子之间相关性的分析更加准确。很多公司已经开始提供Luminex试剂盒,用于基础和临床医学研究以及临床检测。目前,Luminex试剂盒已经可以检测500多种蛋白质分子,包括细胞因子、激素、自身抗体、肿瘤标志物等。
2、luminex液相芯片检测的优势
(1)一次检测1-100个指标;
(2)既能检测蛋白,又能检测核酸;
(3)既能用于临床,又能用于科研。
3、液相芯片的应用
(1) DNA杂交分析
SNP检测
基因表达谱分析
(2)免疫学分析
细胞因子检测
受体-配体分析
酶分析
蛋白质-蛋白质相互作用分析
蛋白质-DNA相互作用分子
服务内容包括不限于:
l 细胞因子/化学因子检测
l 细胞信号转导检测
l 神经因子检测
l 骨代谢因子检测
l 皮肤生长调控因子检测
l 凋亡及败血症因子检测
l 免疫球蛋白分型检测
l 内分泌激素检测
l 心血管因子检测
l 肾脏毒性研究检测
l 代谢因子检测
4.检测样本类型
血清、血浆、细胞培养上清、蛋白提取物等(眼泪、房水、唾液、体腔灌洗液、细胞裂解物等)
5. 样品收集及保存
(1)、血清样品的制备:
a.让血液凝固至少30分钟以上,1000g离心10分钟,移出血清后立即进行测定,或分装后在≤-20摄氏度条件下保存。
b. 避免多次冻融(>2)。
c.对于冰冻样品,在使用前应充分融解,混匀后离心。
d.在测定前,推荐3000g离心样品5分钟。
(2)血浆样品的制备
a.血浆收集时推荐使用EDTA作为抗凝剂。对30分钟内收集的血液标本1000g离心10分钟。移出血浆后立即进行含量测定,或分装后在≤-20摄氏度条件下保存。
b.避免多次冻融(>2)。
c.对于冰冻样品,在使用前应充分融解,混匀后离心。
d.制备血浆样品时推荐使用EDTA作为抗凝剂。
e.在含量测定前,推荐3000g离心样品5分钟。
6、样本保存和运输
建议保存于-80度,避免反复冻融。
7、服务流程
制定检测方案→样品检测→结果分析→报告出具→可为客户提供更深层次的服务(实验设计、数据分析、论文撰写与发表)
注: 报告以excel表格形式,包括每种蛋白在每个标本中的表达量。